przychodnia cordis ostrów wlkp

Zyski i straty chromosomowe były równoważne częstościom obserwowanym u dorosłych / starszych myszy WT, co wskazuje, że sam brak Fah nie sprzyja nieprawidłowościom chromosomowym. Ogólnie rzecz biorąc, prawie połowa hepatocytów z ponownie zasiedlonego Hgd + / A Fah. /. myszy wykazywały aneuploidię chromosomu 16, która była znacznie wyższa niż stopień aneuploidii chromosomu 16 obserwowany w WT lub Fah. /. myszy (Figura 1D). Silne wzbogacenie w specyficzną utratę chromosomu 16 wskazuje, że aneuploidia przyczynia się do adaptacji funkcjonalnej wątroby w przewlekle uszkodzonym Hgd + /. Fah. /. myszy. Rycina 2 Aneuploidia chromosomowa w hepatocytach. (A) Hepatocyty izolowane od zdrowych myszy WT były kariotypowane. Procenty hepatocytów z zyskami swoistymi dla chromosomów (szare słupki) i stratami (czarne słupki) są wskazane dla młodych myszy (w wieku od 20 do 21 dni, n = 3), dorosłych myszy (w wieku 4 do 5 miesięcy, n = 5), i starszych myszy (w wieku 10 do 15 miesięcy, n = 6). Procenty pochodziły z danych zebranych w ramach każdej grupy. (B) Hepatocyty z w pełni zaludnionego Hgd + / P Fah. /. myszy były kariotypowane (n = 4); pokazano profil reprezentatywny. (C) Karyotypy zostały również określone dla hepatocytów z Fah. /. myszy, które były poza NTBC. Procenty pochodziły z danych zbiorczych (n = 4). (D) Aneuploidia chromosomu 16 jest wskazana dla wszystkich myszy kariotypowanych. Dane są wyświetlane jako średnie. SEM. * P <0,005; ** P = 0,03. Analiza genomowa hepatocytów odpornych na uszkodzenie. Główną zaletą kariotypowania metafaz jest wyjaśnienie tożsamości chromosomu i liczby kopii na poziomie pojedynczej komórki. Jedną z wad jest jednak badanie stosunkowo małej wielkości próby; typowo określa się 20 kariotypów na próbkę. Dlatego przeprowadziliśmy analizę porównawczą hybrydyzacji genomowej (aCGH) w celu analizy wariancji liczby kopii z tysięcy komórek. To podejście umożliwia również mapowanie wysokiej rozdzielczości zmian chromosomów. Populacje komórek wątrobowych wzbogaconych w hepatocyty izolowano od niezarobionych i ponownie zaludnionych myszy. Wykorzystano zarówno samice, jak i samce. Wątrobowy DNA zmieszano z niedopasowanym pod względem płci DNA referencyjnym pochodzącym z splenocytów WT, a następnie hybrydyzowano z mikromacierzami CGH zawierającymi około 180 000 sond równomiernie rozproszonych w całym genomie (Tabela dodatkowa 1). Zmiany w liczbie kopii chromosomu są przedstawione jako stosunek log2 (ryc. 3). Stosunek 0 oznacza równoważną względną liczbę kopii między wątrobowym a referencyjnym DNA. Stosunek a1 lub wskazuje odpowiednio stratę lub zysk w całej populacji wątrobowego DNA. Na przykład, zmiany liczby kopii nie zostały wykryte dla autosomów myszy (WT, mężczyzna); jednak,. utrata. chromosomu X zgłoszono z powodu hybrydyzacji niedopasowanej płci (Figura 3). Figura 3 Skrótowa liczba kopii w pulach hepatocytów. Zmiany w liczbie kopii chromosomu oceniano za pomocą analizy aCGH, stosując populacje wzbogacone w hepatocyty izolowane z myszy WT (n = 2), Hgda3 / Fah2 /. myszy pozbawione NTBC (n = 2) i wysoko zaludnione Hgd + / y Fah. /. myszy bez NTBC (n = 4). Intensywność hybrydyzacji dla chromosomów wątrobowych wykreślono jako stosunek log2 względem niedopasowanych diploidalnych chromosomów (pochodzących od splenocytów). Log2 dla p1 wskazuje na utratę chromosomu (np. Utratę chromosomu X u myszy 1), podczas gdy log2 wskazuje na wzmocnienie chromosomu (np. Wzmocnienie chromosomu X u myszy 2). Zmiany liczby kopii w chromosomie Y z powodu niedopasowania płci zostały wykryte, ale nie zostały pokazane na wykresach. Skalowanie zmian liczby określono na podstawie genomowego DNA hepatocytów oczyszczonego z myszy WT, Hgda Fah . myszy (poza NTBC) i odporny na zranienie Hgd + /. Fah. /. myszy. Po pierwsze, analiza myszy WT nie wykazała zmian w liczbie chromosomów wątrobowych wśród autosomów (Figura 3, myszy 1, 2)
[hasła pokrewne: nowotwór płuc objawy, olej z wiesiolka, objawy chłoniaka ]