gdynia sucharskiego 2

Skuteczność inaktywacji UV i leczenia inhibitorami 3C. Komórki Huh-7,5 infekowano UVHA inaktywowanym eHAV lub nieleczonym eHAV w obecności 3C-inh, a RNA HAV związany z komórkami mierzono za pomocą RT-qPCR i porównywano z tym w komórkach zakażonych nieleczonym HAV po 48 godzinach. (E) pDC transfekowano genomowym RNA HM175 / 18f w obecności i pod nieobecność IRS-661 lub subgenomowego RNA HAV-luc lub niekompetentnego wariantu HAV-Luc-a 3D. Supernatant IFN-. poziomy mierzono za pomocą testu ELISA. Wyniki reprezentują średnią. SEM (n = 2 lub 3 hodowle) uzyskane z pDC od pojedynczych dawców. HAV nie koduje żadnych glikoprotein i nie ma dowodów sugerujących, że białka wirusowe istnieją na powierzchni eHAV. Ponieważ wejście wielu wirusów otoczkowych jest ułatwione przez członków rodziny TIM / TAM wiążących fosfatydyloserynę (PtdSer) na ich powierzchni (28, 29), a ponieważ TIM1 jest konstytutywnie wyrażana przez pDC (30), zapytaliśmy, czy taka interakcja odgrywa rolę w pobieranie eHAV. Rzeczywiście, rekombinowana aneksyna V (która wiąże PtdSer) (28) hamowała wychwyt eHAV przez pDC (Figura 3B). Aneksyna V również zmniejszała IFN-y wytwarzanie przez pDC eksponowane na stężone płyny supernatantu z hodowli komórek zakażonych HAV (Figura 3C). Jednak przeciwciało przeciwko TIM1 nie blokowało wychwytu eHAV (dane nie pokazane), co sugeruje, że receptory PtdSer inne niż TIM1 są zaangażowane w wychwyt eHAV. Intrygujące, chociaż TIM1 jest uważany za receptor komórkowy dla nierozwiniętego HAV (24), nieopracowane wiriony nie zostały efektywnie pobrane przez pDC. Replikacja genomu HAV nie jest wymagana do indukcji IFN-y ekspresja pDC, ponieważ ani dezaktywacja UV, ani inhibitor proteazy 3Cpro HAV (31) nie zmniejszyły tej odpowiedzi (Figura 3D). Stwierdziliśmy również, że pDC mogą być aktywowane przez transfekcję syntetycznego replikonowego RNA (HAV-Luc) do pDC i że niekompetentna wersja replikonu, z mutacją przesunięcia ramki w sekwencji kodującej polimerazę (HAV-Luc-a 3D ), stymulował podobne poziomy IFN-y produkcja (rysunek 3E). pDC są przejściowo rekrutowane do wątroby podczas ostrej infekcji HAV. Ponieważ nasze dane pokazują, że pDC są zdolne do wykrywania zakażenia HAV i wydzielania dużych ilości IFN-y, staraliśmy się zrozumieć, dlaczego silna odpowiedź IFN typu I nie występuje w wątrobie podczas ostrego zapalenia wątroby typu A. Aby ustalić, czy pDC są rekrutowane do W wątrobie zbadaliśmy dostępne zarchiwizowane materiały od 2 szympansów wcześniej doświadczalnie zakażonych HAV (12). Barwienie immunofluorescencyjne fragmentów tkanki wątrobowej, z użyciem zarówno przeciwciał poliklonalnych, jak i monoklonalnych przeciwko ludzkiej domenie lektynowej domeny C typu 4, element C (BDCA2, znany również jako CD303 lub CLEC4C), swoisty marker dla pDC, ujawniło liczne komórki BDCA2 + w przestrzeniach sinusoidalnych tydzień po prowokacji wirusem u obu zwierząt (Figura 4). W przypadku szympansa 4×0293 na każde 103 komórki jądra przed prowokacją dożylną HAV było mniej niż komórka BDCA2 +. To było niezmienione 2 dni po pojedynku, ale wzrosło do 29. 9 komórek BDCA2 + na 103 jądrzaste komórki w tygodniu, gdy wewnątrzwątrowa ekspresja ISG15 i indukowanego przez IFN białka z mRNA tetratricopeptide powtórzenie (IFIT1) była maksymalna (12), a następnie spadła do 1,6 na 103 komórki w 2 tygodnie (Figura 4A). Infiltracja pDC następowała po podobnym wzorze kinetycznym u szympansów 4×0395, ale ekspresja mRNA ISG osiągnęła szczyt nieco później, po 2 tygodniach (Figura 4B). Co ważne, eHAV był obecny we krwi obu zwierząt w 1. tygodniu (11, 12). Viremia osiągnął szczyt w tygodniach 2-3, a następnie gwałtownie spadł, pomimo utrzymywania się wirusowego RNA w wątrobie. Figura 4 pDC są przejściowo rekrutowane do wątroby szympansów zakażonych HAV. (A) IFN-y surowicy a zmiany wewnątrzwątrobowego nadmiaru mRNA ISG15 i IFIT1 przedstawiono razem z poziomami wewnątrzwątrobowego RNA HAV u szympansa, 4×0293, doświadczalnie zakażonego HAV
[podobne: olej z kiełków pszenicy, objawy raka pluc, olx puck ]