augustów leży nad jeziorem

Wyniki te dostarczają dalszych dowodów na to, że pDC są stymulowane przez eHAV, a nie powolnie sedymentujące egzosomy, które nie zawierają enkapsydowanych genomów HAV. Figura 2 eHAV indukuje IFN-y produkcja przez pDCs. (A) Seryjne rozcieńczenia stężonego supernatantu (100 000 g peletki) z komórek zainfekowanych HAV zmieszano z pDC (1 x 106 / ml) i inkubowano przez 20 godzin. IFN-. poziomy (średni zakres w powtórzonych testach) wykreślono względem zawartości RNA HAV. Nieskoncentrowany supernatant z zainfekowanych (czerwona strzałka i trójkąt) i pozornie zainfekowanych (biały kwadrat) komórek testowano równolegle. (B) Skoncentrowane płyny supernatantu z komórek zakażonych HAV poddano izotopowemu wirowaniu gradientowemu, a poszczególne frakcje gradientu inkubowano z pDC (1 x 106 / ml). Zawartość frakcji RNA HAV określono za pomocą RT-qPCR. IFN-. Przedstawiona produkcja przedstawia wyniki od 3 dawców (średnia . SEM). Aktywność AChE zmierzono za pomocą testu enzymatycznego. (C) Korelacja (test Spearmana) między zawartością eHAV frakcji gradientu izopiknicznego, pokazaną jako ekwiwalent genomu na pDC i IFN-a wyprodukowane (średnia . zakres w powtórzonych testach). (D) Northern biot RNA HAV: pełnej długości RNA transkrybowanego HM175 / 18f HV175 / 18f, RNA wyekstrahowanego z pików o gradientowym gradiencie, zawierających eHAV lub nie rozwinięty HAV (średni zakres a w testach replikacyjnych). (E) Kolejne frakcje gradientu zawierające eHAV z gradientu podobnego do gradientu w B połączono, zatężono i poddano ultrawirowaniu z szybką strefą. Frakcje zbierano od góry i oceniano pod kątem zawartości RNA HAV, aktywności AChE i aktywności stymulującej pDC (P105 i P106 wskazują poszczególnych dawców) (średni zakres w testach replikacyjnych). Przedstawiono reprezentatywne wyniki z z 3 niezależnych eksperymentów. Przedstawiono Western blot ALIX i flotyliny-1 w frakcjach gradientu strefowego. Efektywne wykorzystanie kont eHAV do aktywacji pDC. Rozważaliśmy możliwość, że e preferencyjne wykrywanie eHAV w porównaniu z HAV przez pDC może odzwierciedlać większy wychwyt otaczających wirionów w porównaniu z nie wywołanymi wirionami. Aby to przetestować, inkubowaliśmy świeżo wyizolowane pDC z równymi ilościami oczyszczonego przez gradient eHAV lub HAV (oznaczonego ilościowo za pomocą RT-qPCR). Komórki płukano intensywnie w odstępach czasowych, a RNA ekstrahowano w celu oceny ilości genomów wirusowych związanych z komórkami. Zasadniczo większe ilości eHAV były związane z pDC w porównaniu z nierozwiniętym HAV po godzinie (Figura 3A). Podczas gdy ilość RNA eHAV związanego z komórką pozostała stabilna lub nieznacznie wzrosła w ciągu 23 godzin, ilość niewspółkanej wirionowej RNA związanej z komórkami stopniowo zmniejszała się. Zgodnie z tym, tylko pDC narażone na eHAV wytwarzały IFN-y (Figura 3A). W związku z tym eHAV jest efektywniej wykorzystywany przez pDC w porównaniu z nierozwiniętym HAV, właściwością nadaną przez otoczkę i prawdopodobnie będzie to odpowiadało zdolności eHAV do aktywowania pDC. Ryc. 3 Różnicowanie wychwytu eHAV w porównaniu z nie rozwiniętym HAV przez pDCs. (A) pDC eksponowano na równe ilości oczyszczonego z gradientu eHAV lub nierozwiniętego HAV i związanego z komórką wirusowego RNA i supernatantu IFN-y. poziomy określano w odstępach czasu. Koła i kwadraty reprezentują odpowiednio komórki od 2 indywidualnych dawców. (B) pDC inkubowano z eHAV w obecności lub pod nieobecność aneksyny V (2 lub 10 .g / ml), a wirusowe RNA związane z komórkami określano w odstępach przez RT-qPCR. (C) IFN-y wytwarzane przez pDC eksponowane na stężone płyny supernatantu z hodowli komórek zakażonych pozornie lub HM175 / p16 w obecności lub nieobecności aneksyny V (2 .g / ml). (D) IFN-y wytwarzane przez pDC eksponowane na oczyszczony w gradiencie eHAV po inaktywacji światłem UV lub hodowane przy pomocy eHAV w obecności 100. M inhibitora HAV 3Cpro (3C-inh) (EC90 = 62. M, CC50 = 3 mM)
[patrz też: objawy chłoniaka, objawy chorej tarczycy, objawy wirusa hiv ]